Культурные свойства ротавирусов человека. Кишечные заболевания.
|
|
| Культурные свойства ротавирусов человека В отличие от ротавирусов животных, хорошо репродуцирующихся в клеточных тканевых культурах, ротавирусы человека плохо культивируются в клеточных системах, их адаптация к культуре клеток чрезвычайно сложна. Поэтому были предложены и апробированы различные способы усиления вирусной репродукции в культуре клеток с использованием физических и химических факторов (центрифугирование, покачивание, тепловое воздействие, влияние протеолитических ферментов и диме-тилсульфоксида и др.). Наибольшее значение для адаптации изолятов к различным видам клеточных культур имеет применение трипсина (Hughes J., 1993; Konno Т. et al., 1993; Falconer M. et al., 1995; Welter M. et al., 1991; Sato K. et al., 1995). Механизм действия трипсина основан на его воздействии на вирус путем его активации и расщепления вирусных белков на отдельные фрагменты, что облегчает проникновение вируса в клетку. При этом расщепление VP4 усиливает проникновение, но не связывание вируса в клетке. С другой стороны, трипсин действует непосредственно на клетку и ее оболочку, способствуя разрыхлению клеточных мембран (Falconer М. et al., Sato К. et al., 1995). Подтверждением сказанному являются исследования по изучению культивирования ротавирусов группы А в гетероплоид-ных клетках двух линий (4647 и 455) почки и селезенки африканской зеленой мартышки. Обе линии оказались чувствительными ко всем апробированным ротавирусам при условии наличия трипсина в поддерживающей среде, но урожай вируса был в 2-4 раза выше при использовании линии 455. Особенно высокий выход вируса отмечен для штамма SA-11 через 24 часа после заражения. Ингибирующее воздействие сыворотки КРС, связанное с наличием ингибиторов трипсина, устраняли путем трехкратного отмывания клеток буферным раствором. Добавка эмбриональной сыворотки способствовала высокому выходу вируса. В то же время отсутствие трипсина в поддерживающей среде подавляло инфекционную активность ротавирусов (Хапчаев Ю. X. и др., 1989). Обработка непосредственно вируса трипсином также влияет на процессы пенетрации и репродукции вируса в клеточных культурах. Исследования, проведенные со штаммом KUN на клетках МА-104, показали, что обработка вируса трипсином в концентрации 2 мкг/мл приводила к высокой репродукции вируса (до 5,0 lg) уже через 5 мин. В эти же сроки уровень репродукции вируса без обработки трипсином, но в среде с ферментом, был равен 3,6 lg. Вирус без предварительной обработки трипсином и без его добавления в питательную среду не продуцировался (Konno Т. et al., 1993). Электронномикроскопически показано, что вирус, обработанный трипсином, входит в клетку путем прямой пенетрации через клеточную мембрану, а необработанный — путем эндоци-тоза, но без последующей репликации (Konno Т. et al., 1993; Falconer М. М. et al., 1995). В последние годы выполнены исследования по изучению природы рецепторов клеток, определяющих их связь с ротавирусами, в результате которых выявлено наличие трех видов гликопротеинов с разной молекулярной массой и определено, что ротавирусы разных видов животных связываются с разными рецепторами (Holwes J. et al., 1994). Обширные исследования по сравнению воздействия целого ряда ферментов были выполнены Sato К. et al. (1995). Проведя сравнительное изучение влияния различных ферментов на повышение репродуктивной активности ротавирусов группы А человека, крупного рогатого скота, лошадей и свиней, авторы показали, что наряду с трипсином положительное воздействие при введении в питательные среды оказывают: панкреатин, протеаза, щелочная фосфатаза и пепсин. Напротив, альфаамилаза и липаза ингибируют репродукцию лошадиного и свиного ротавирусов. Другие энзимы (лактаза, лизоцим, рибонуклеаза) или не влияют на ротавирусы, или дают очень слабый положительный эффект (Sato К. et al., 1995). Большой интерес представляют культуральные свойства других типов ротавирусов и их адаптация к клеточным культурам. Ротавирус группы С (штамм Cowlen) адаптировали и серийно пассировали на перевиваемой линии тестикулярных клеток мышей (ST). Рост ротавируса группы С в клетках ST отмечали при наличии трипсина в поддерживающей среде, что приводило к отслоению клеток и их лизису. Активная репликация вируса подтверждалась анализом профиля РНК, иммуноэлектронной микроскопией и иммунофлуоресцентным методом (ИФМ). Показанная неизвестная ранее способность к адаптации RV группы С к вторичной линии клеток ST значительно расширяет возможности диагностики RV инфекции (Welter М. et al., 1991). Таким образом, изучение культуральных свойств ротавирусов имеет не только научную, но и прикладную значимость в плане оптимизации диагностики, а также разработки диагностических и профилактических препаратов. Все настоящие и красивые индивидуалки в Екатеринбурге на сайте Sexvgorode96. |
|
Другие компании и организации в рубрике —
Справочно-информационные услуги в Новоуральске:
Справочно-информационные услуги в Новоуральске:
|
«Novouralsk Club», мобильное приложение
|
«Новоуральский Центр бесплатной юридической помощи»
|
|
«Новоуральск-БИСС», Бесплатная Информационно-Справочная Служба
|
«Справочная Что? Где? Почем? 8 (34370) 5-18-18», Справочная служба
|
